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用于dsDNA定量检测的PicoGreen®荧光染料在TBS-380微型荧光计上的应用

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简介:

用于dsDNA定量检测的PicoGreen®荧光染料在TBS-380微型荧光计上的应用
在分子生物学的试验过程中,PicoGreen® dsDNA定量试剂盒是荧光检测双链DNA并进行定量的一种产品,这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术中的:cDNA 文库的构建;用于亚克隆的 DNA 片段纯化及应用,比如进行DNA定量、产物扩增1,2和引物的进一步检测3,4。
核酸浓度的常用检测方法是在260nm(A260)处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号具有很大的影响,并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰,无法区分DNA和RNA,而且这种方法不灵敏性(5μg/mLdsDNA溶液A260=0.1)。Hoechst(双苯酰亚胺)作为灵敏的荧光核酸染料也有多此类问题,用Hoechst 33258 Dye检测时,对dsDNA具有某种程度的选择性,在蛋白质存在的情况下没有表现出明显的荧光增强;在DNA浓度低至10ng/mL时,也可定量检测DNA浓度[5]。