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用于蛋白质定量检测的 NanoOrange™荧光染料在TBS-380微型荧光计上的应用.

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简介:

用于蛋白质定量检测的 NanoOrange™荧光染料在TBS-380微型荧光计上的应用.
Turner BioSystems 公司的TBS-380微型荧光计和Molecular Probes公司的NanoOrange™ 蛋白质定量检测试剂盒的完美结合为蛋白测定提供了一种方便灵敏的方法,可以检测浓度低至100 ng/mL的蛋白样品,灵敏度高于Bradford 法 (1 µg/mL)和Lowry 法 (1 µg/mL)等分光光度方法,也高于280-nm吸光光度法(50 µg/mL).与Bradford 法比较,NanoOrange™ 试剂法受不同蛋白影响更小。只需将蛋白样品加入到NanoOrange™ 试剂中稀释到一定的浓度,在95° C下加热10分钟,等温度降低到室温时就可以测定其荧光值。另外,如果样品避光保存,荧光值能能保持6小时而不丧失其灵敏度。实际上NanoOrange™试剂在水溶液中是不会发荧光的,当与蛋白相互作用后,在570—590 nm 之间荧光强度逐渐增强,大约在470—490 nm 之间达到强。在线性范围内,使用TBS-380微型荧光计可以测定浓度为100 ng/mL 到10 µg/mL蛋白样品。 (图 1 和图2)。