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乙酰胆碱酯酶(AChE)活性发光检测

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简介:

    乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)是一种神经递质,能特异性的作用于各类胆碱受体。乙酰胆碱参与神经递质过程,在下一次神经冲动开始前乙酰胆碱会被AChE 降解掉。AChE 会被神经内毒素和杀虫剂所抑制,由于神经内毒素和杀虫剂对人和动物的严重毒副作用而成为很多科学家所关注的一个领域。另外,在一些疾病治疗过程中,例如在Alzheimer's 疾病中,研究人员也对AChE 抑制剂可能产生的功能进行了研究。
    AChE 活性检测试剂盒使用乙酰胆碱经过一系列酶促反应,在发光反应中快速地将反应中活性AChE 的量以光信号形式输出。样品中的AChE 抑制剂的存在使得样品中ATP 水平升高,这可以通过发光来定量。

原理:

检测方法:

以aCella – AchE检测试剂盒为例
1. 试剂准备
将A、B、C三个溶液分别避光溶解,并且平衡到室温。
2. 样品准备
对照1:加入溶液50ulC,不包含AChE,代表100%抑制
对照2:加入溶液50ulA,不加入样品或抑制剂,代表无抑制
样品:加入10-50ul样品或抑制剂,重复设置三个复孔
对以上所有待测液加入50ul溶液B
3. 检测结果
第一次检测时,可以对单个样品多次检测发光,每次间隔30秒,以确定反应的稳定时间。
然后所有样品在这个时间点上检测发光值。
 

参考文献:

  1. Schallreuter KU et al. Activation/deactivation of acetylcholinesterase by H2O2: more evidence for oxidative stress in vitiligo. Biochem Biophys Res Commun. 2004 Mar 5;315(2):502-8.
  2. Bolognesi ML et al. Propidium-based polyamine ligands as potent inhibitors of acetylcholinesterase and acetylcholinesterase-induced amyloid-beta aggregation. J Med Chem. 2005 Jan 13;48(1):24-7.
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