发光检测

荧光检测

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萤火虫荧光素酶报告基因发光检测

阅12188次 / 原平皓生物

简介:

        荧光素酶(Luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称,其中最有代表性的是来自北美萤火虫(Photinus pyralis)体内的荧光素酶。萤火虫荧光素酶属于加氧酶(oxygenase),其发光反应需要O2和Mg2+参与;有辅酶A(CoA)存在时能提高反应效率,增加发光时间。萤火虫荧光素酶无需翻译后修饰,即可表现出荧光素酶活性。因此可将萤火虫荧光素酶的基因插入不同载体,作为报告基因,在细胞中表达。

原理:






检测方法:

以Steady-Glo检测试剂盒为例

1. 试剂制备
a) 将试剂盒中的底物与Buffer混合,形成Steady-Glo检测液。
b) 使用前检测液需要平衡到室温

2. 样品准备
向细胞培养物中加入等体积的检测液,裂解5min。

3. 样品检测
取一定量的反应液,加入发光检测仪中检测发光值

参考文献:

  1. de Wet, J.R. et al. (1987) Firefly luciferase gene: Structure and expression in mammalian cells. Mol. Cell. Biol. 7, 725–37.
  2. DNA delivery from matrix metalloproteinase degradable poly(ethylene glycol) hydrogels to mouse cloned mesenchymal stem cells Yuguo Lei, Tatiana Segura*

检测仪器

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