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细胞色素P450(CYP450)发光检测

阅 8308次 / 原平皓生物

简介:

        细胞色素P450(cytochromeP450,简称CYP450)为一类亚铁血红素—硫醇盐蛋白的超家族,它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢。该酶系是重要的药物非靶点的功能蛋白质,参与药物代谢的最重要的I相酶,催化了90%以上的药物、毒素以及致癌剂等在人体内的代谢转化和清除。
        将P450的酶促反应与荧光素酶发光反应相偶联,可以通过检测发光的方式来检测P450的活性。

原理:

  

检测方法:

1. 试剂准备
a) 按照说明书,配制4×CYP反应液
b) 按照说明书,配制2×NADPH
c) 按照说明书,配制荧光素酶检测液

2. 样品准备
a) 每孔12.5ul的待测样品,体积不够时,使用纯水稀释到12.5ul

3. 发光检测
a) 每孔中加入12.5ul的待测样品
b) 然后加入12.5ul的4×CYP反应液,在37℃下孵育10min
c) 然后加入25ul的2×NADPH启动CYP反应
d) 室温下继续孵育10-40min
e) 最后加入50ul荧光素酶检测液,使用发光检测仪检测发光

参考文献:

  1. Cali, J.S. et al. (2006) Luminogenic cytochrome P450 assays. Expert. Opin. Drug. Metab. Toxicol. 2, 629–45.
  2. Stevens, J.C. (2006) New perspectives on the impact of cytochrome P450 3A expression for pediatric pharmacology. Drug Discov. Today 11, 440–5.
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