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去泛素化酶DUBs发光检测

阅 7841次 / 原平皓生物

简介:

        泛素—蛋白酶体途径是细胞内一个重要的蛋白质降解调节系统。通过对底物蛋白的多聚泛素化并经蛋白酶体降解,可以影响或调节多种细胞活动,包括:基因转录、细胞周期调节、免疫反应、细胞受体功能及肿瘤生长、炎症过程等。该途径也是一个被严格调控的可逆过程,其中去泛素化酶的调节就是一个重要的环节。目前研究证实,细胞内广泛存在许多去泛素化酶(DUBs),主要分为以泛素羧基末端水解酶家族和泛素特异性加工酶家族为主的5种类型。这些不同类型的去泛素化酶均能水解底物蛋白上的泛素链之间的链接,起到去泛素化的作用,对蛋白降解进行反向调节,从而影响蛋白质的功能。如去泛素化酶可以影响或调节细胞的生长发育、信号转导和神经病变或肿瘤等许多细胞生理和病理过程。
        将DUBs的酶促反应与荧光素酶反应相偶联,可以通过荧光素酶的发光反应来检测DUBs的活性,从而进行DUBs酶活测定或DUBs抑制剂筛选。

原理:

检测方法:

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参考文献:

  1. Chen, Z. et al. (2007) Proteolytic processing and deubiquitinating activity of papainlike proteases of human coronavirus NL63. J. Virol. 81, 6007–18.
  2. Drag, M. et al. (2008) Positional-scanning fluorogenic substrate libraries reveal unexpected specificity determinants of deubiquitinating enzymes (DUBs). Biochem. J. 415, 367–75.
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