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单胺氧化酶(MAO)发光检测

阅 8115次 / 原平皓生物

简介:

      单胺氧化酶(MAO)是一种膜结合线粒体酶,在多巴胺氧化代谢中起重要作用。根据其对底物或抑制剂结合的特异性、细胞分布、免疫特异性等特性分为A和B两种形式。它与人体的很多精神性疾病以及健康有着密切的关系,譬如帕金森症、阿尔之海默症、精神分裂症和攻击性行为及癌症等。因此,MAO作为新药物的靶标越来越受到广泛的关注和研究。
      将MAO的酶促反应与荧光素酶的发光检测相偶联,即可通过发光检测来确定MAO的活性,从而筛选出可影响MAO活性的药物或化合物。

原理:

检测方法:

1. 试剂准备
a) 按照说明书,制备4×MAO底物溶液
b) 按照说明书,制备2×MAO酶溶液
c) 按照说明书,制备荧光素酶检测溶液

2. 样品准备
a) 制备4×待检测样品

3. 检测发光
a) 每孔中加入12.5ul的4×MAO底物溶液
b) 再加入12.5ul的4×待测样品
c) 再加入25ul的2×MAO酶溶液
d) 室温下孵育1h
e) 每孔加入50ul荧光素酶检测溶液,混匀
f) 室温下孵育20min后,使用发光检测仪检测发光

参考文献:

  1. Valley, M., et al. (2006) A bioluminescent assay for monoamine oxidase activity. Anal Biochem. 359, 238–46.
  2. Geha, R.M. et al. (2001) Substrate and inhibitor specificities for human monoamine oxidase A and B are influenced by a single amino acid. J. Biol. Chem. 276, 9877–82.
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