发光检测

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应用发光检测ATP含量

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简介:

三磷酸腺苷(ATP)存在于从微生物到高等动植物细胞所有的生物体中。ATP在细胞体内主要作用是提供能量,参与体内脂肪、蛋白质、糖和核酸的代谢,是机体能量的重要来源,在维持生物体的正常机能上有着无可替代的作用。ATP作为重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用,可作为细胞活性的一个标志物。通过监测ATP含量的改变,可以评价多种药物、生物制剂或生物活性物质引起的细胞杀伤、细胞抑制和细胞增殖作用。ATP也常作为微生物污染的一个指标,通过检测ATP含量,可以检测食品、水、啤酒、药品、化妆品等样品中的微生物含量,从而反应出其受污染的程度。

ATP检测可以用成色反应、荧光、发光或同位素等方法实现。采用发光方法检测ATP,具有更高的敏感性,而且简便、快速,是目前*为流行的方法。该方法基于萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)催化荧光素氧化,消耗ATP,发出光子的高效发光反应,具有发光效率*高、发光量与ATP含量呈很好的线性关系的优点。

原理:


检测方法:

  1. 试剂准备: 按照说明书,将底物与Buffer配制成检测液。
  2. ATP标准品制备: 将ATP标准品进行10倍梯度稀释,使其浓度范围为:10uM – 100pM
  3. 制备标准曲线: 按照说明书,取5ulATP样品与50ul检测液混合,检测发光值(反应温度要求室温)。根据不同浓度ATP的发光值制作标准曲线。
  4. 检测样品: 使用裂解液将样品裂解,释放ATP。取5ul含ATP的样品裂解液,与50ul检测液混合,检测发光值(反应温度要求室温)。将发光值带入标准曲线,求出ATP含量。

参考文献:

  1. Webster, J.J. et al. (1980) Buffer effects on ATP analysis by firefly luciferase. Anal. Biochem. 106, 7–11.
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