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应用发光检测ATP含量

阅 9874次 / 原平皓生物
关键词: Luciferase, 荧光素酶, 萤火虫, 发光检测, ATP

简介：

三磷酸腺苷(ATP)存在于从微生物到高等动植物细胞所有的生物体中。ATP在细胞体内主要作用是提供能量,参与体内脂肪、蛋白质、糖和核酸的代谢,是机体能量的重要来源,在维持生物体的正常机能上有着无可替代的作用。ATP作为重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用，可作为细胞活性的一个标志物。通过监测ATP含量的改变，可以评价多种药物、生物制剂或生物活性物质引起的细胞杀伤、细胞抑制和细胞增殖作用。ATP也常作为微生物污染的一个指标，通过检测ATP含量，可以检测食品、水、啤酒、药品、化妆品等样品中的微生物含量，从而反应出其受污染的程度。

ATP检测可以用成色反应、荧光、发光或同位素等方法实现。采用发光方法检测ATP，具有更高的敏感性，而且简便、快速，是目前*为流行的方法。该方法基于萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）催化荧光素氧化，消耗ATP，发出光子的高效发光反应，具有发光效率*高、发光量与ATP含量呈很好的线性关系的优点。

原理：


检测方法：

  1. 试剂准备: 按照说明书，将底物与Buffer配制成检测液。
  2. ATP标准品制备: 将ATP标准品进行10倍梯度稀释，使其浓度范围为：10uM – 100pM
  3. 制备标准曲线: 按照说明书，取5ulATP样品与50ul检测液混合，检测发光值（反应温度要求室温）。根据不同浓度ATP的发光值制作标准曲线。
  4. 检测样品: 使用裂解液将样品裂解，释放ATP。取5ul含ATP的样品裂解液，与50ul检测液混合，检测发光值（反应温度要求室温）。将发光值带入标准曲线，求出ATP含量。

参考文献：

  1. Webster, J.J. et al. (1980) Buffer effects on ATP analysis by firefly luciferase. Anal. Biochem. 106, 7–11.

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