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应用荧光素酶报告基因进行I型干扰素的生物学活性检测

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简介:

        干扰素(Interferon,IFN)是重要的抗病毒活性物质,是机体非特异免疫系统的重要组成部分,在动物和人类抗感染和肿瘤临床治疗上有着广泛的应用。但长期以来一直缺乏理想的INF活性标准定量检测方法。
        以往常用的IFN活性定量方法包括:
  1. 抗病毒活性检测法(Antiviral assavs,AVA):AVA的敏感度和准确性较低,并具有一定的生物安全危险;
  2. ELISA方法:其方法简单,但是只能检测IFN的抗原性,一些无生物学活性的类IFN蛋白会影响检测结果,并且不同的IFN需要不同的单抗;
  3. 其他基于IFN抑制细胞增殖、调节细胞功能活性等特性的检测方法:具有局限性,或方法繁琐。
        I 型IFN抗病毒的主要途径是经由JAK-STAT信号转导通路激活Mx启动子(Mx promoter,Mxp),其表达的Mx蛋白(Mx protein)能够抑制负链RNA病毒复制。因此构建包含荧光素酶报告基因的Mx启动子载体,即可通过检测荧光素酶报告基因来检测I型干扰素的活性。

原理:

检测方法:

  1. 构建包含Mx启动子和荧光素酶报告基因的载体;
  2. 转染细胞并培养;
  3. 加入IFN处理细胞;
  4. 检测荧光素酶活性。

参考文献:

  1. 陈伟业,葛金英,肇慧君等。基于Mx启动子和荧光素酶报告基因定量检测鸡I型干扰素生物学活性的研究。畜牧兽医学报,2008,39(1),123-128
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